Para uma maior precisão, no exemplo acima, somente utilizamos amostras cuja absorbância se restringe à
região linear da curva-padrão. No caso da curva padrão abaixo, somente absorbâncias entre 0.12 e 1.5
podem ser consideradas, o que corresponde a uma concentração de 50 µg/ml a 2000 µg/ml. Se a amostra
gerar uma absorbância acima destes valores, deve-se diluir a amostra e uma nova medição deve ser feita
(deve-se levar em conta a diluição depois).
Após identificarmos a fase linear da curva-padrão, devemos obter a sua equação da reta. A equação da
reta pode ser obtida geometricamente, usando o gráfico desenhado em papel milimetrado; através de
uma calculadora científica; ou através de um software, como o Microsoft Excel.
No exemplo acima, a equação da reta obtida a partir da curva-padrão é a seguinte:
Y = 0,0007x + 0,0984
Note que, substituindo-se y por Absorbância (A) e x por concentração de proteínas ([proteínas]), temos:
A = 0,0007 x [proteínas] + 0,0984
ou seja, se quisermos converter as absorbâncias obtidas em concentração de proteínas,
temos que usar a seguinte fórmula:
[proteínas] =
(,)
,
Após fazer as conversões, devemos observar se houve alguma amostra foi diluída e corrigir o valor para se
chegarmos à concentração final da amostra. Se houver réplicas, o resultado final deve ser a média dos
Para uma maior precisão, no exemplo acima, somente utilizamos amostras cuja absorbância se restringe à
região linear da curva-padrão. No caso da curva padrão abaixo, somente absorbâncias entre 0.12 e 1.5
podem ser consideradas, o que corresponde a uma concentração de 50 µg/ml a 2000 µg/ml. Se a amostra
gerar uma absorbância acima destes valores, deve-se diluir a amostra e uma nova medição deve ser feita
(deve-se levar em conta a diluição depois).
Após identificarmos a fase linear da curva-padrão, devemos obter a sua equação da reta. A equação da
reta pode ser obtida geometricamente, usando o gráfico desenhado em papel milimetrado; através de
uma calculadora científica; ou através de um software, como o Microsoft Excel.
No exemplo acima, a equação da reta obtida a partir da curva-padrão é a seguinte:
Y = 0,0007x + 0,0984
Note que, substituindo-se y por Absorbância (A) e x por concentração de proteínas ([proteínas]), temos:
A = 0,0007 x [proteínas] + 0,0984
ou seja, se quisermos converter as absorbâncias obtidas em concentração de proteínas,
temos que usar a seguinte fórmula:
[proteínas] =
(,)
,
Após fazer as conversões, devemos observar se houve alguma amostra foi diluída e corrigir o valor para se
chegarmos à concentração final da amostra. Se houver réplicas, o resultado final deve ser a média dos
